PRÁCTICA 15: COPROCULTIVO

28.01.2020

OBJETIVO
Aislar e identificar al microorganismo responsable del proceso diarreico FUNDAMENTO Microorganismos como los protozoos, bacterias y virus pueden ser responsables de cuadros gastrointestinales. Ante la sospecha de gastroenteritis es necesario realizar un cultivo de heces o coprocultivo que permita aislar e identificar al microorganismo responsable del proceso diarreico.
Material necesario:

Mechero Bunsen

Asa de platino

Agua destilada estéril

Inóculo de la muestra

Medios de cultivo

PROCEDIMIENTO Para realizar la siembra se utilizaron medios de cultivo enriquecidos y altamente selectivos para aislar únicamente a los gérmenes patógenos.
Los medios utilizados son:

Agar Salmonella- Shigella.
Caldo selenito.
Agar sangre
Agar Hektoen
XLD

1. Realizamos una suspensión en 2,5 mL de solución salina estéril, tomando una porción de heces del tamaño de un guisante y agitando hasta su homogeneización.

2. La siembra se realiza descargando con el hisopo en todos los medios, realizando una siembra en masa hasta la mitad de la placa de Petri.

Siembra en agar sangre

3. Introducimos el hisopo en el caldo selenito agitándolo ligeramente y lo cortamos para poder cerrarlo correctamente.

4. A continuación se le realiza un agotamiento por estrías a todos los medios con un asa de platino, cogiendo de la misma placa de la porción en la que hemos realizado antes la siembra y realizando en la otra mitad este agotamiento por estrías.

5. Incubar a 37ºC durante 24 horas.

6. Pasadas 24 horas sembrar el hisopo en el medio Hektoen. Una vez pasado ese tiempo cogimos el hisopo con unas pinzas y luego cogimos con la mano y realizamos una siembra en Hektoen. La siembra se realiza con un pase en el medio y luego una siembra en masa. Tras ello se vuelve a sumergir el hisopo en el caldo selenito y se realiza una descarga en la otra mitad de la placa de Petri.

RESULTADOS:

29.01.2020

Al día siguiente observamos los resultados que fueron los siguientes:

MacConkey:

Vemos que es lactosa negativo. No se observan bacterias fermentadoras de lactosa.

Agar SS:

Las colonias de color rosa son fermentadoras de lactosa.

Las colonias con centro de color negro y otras incoloras. Ambas son lactosa negativas Se observan los 3 tipos. Posteriormente se realizó un API con 2 colonias de este medio para averiguar que colonias son.

Hektoen:

Las colonias de color salmon fermentan la lactosa

Las colonias azul verdosas tanto con centro negro como sin el son no fermentadores de lactosa

Se pueden observar las 3.

XLD

El medio ha virado a amarillo porque el microorganismo fermenta lactosa, también hay colonias rojas que no fermentan la lactosa

Agar Sangre

No se observa presencia de hemólisis.

En cuanto al medio de Hektoen que se sembró con colonias provenientes del caldo selenito vimos que hubo crecimiento del microorganismo el cual ahora se encuentra en menor proporción, lo siguiente sería realizarle un API.

Además de los medios sólidos, debe inocularse también en un medio líquido de enriquecimiento con el propósito de incrementar la recuperación de enteropatógenos que se hallan en escasa proporción en la muestra

Los medios de enriquecimiento, tras incubación a 37 ºC durante 18 horas, se deben resembrar en medios sólidos (selectivos y moderadamente selectivos) para poder aislar los microorganismos investigados.

31.01.2020

RESULTADOS DEL API

NOTA: la realización del API se realizó de la misma manera que la explicada en una práctica anterior, y tras la incubación procedemos a la lectura de los resultados.

API 1

Salen al menos 3 positivos

API 2

Salen al menos 3 positivos

Como al menos son 3 positivos las pruebas son válidas.

Se procede de la siguiente forma en cada uno de los APIs

Echamos una gota de FeCl3 para revelar el TDA, si sale marrón es positivo y si se queda amarillo es negativo.
Echamos una gota de R1 y R2 para revelar la glucosa, si se queda azul o verde es negativo y si queda amarillo es positivo.
Seguidamente echamos una gota de Reactivo de James en el indol. Si aparece rosa es positivo.