PRÁCTICA 2: PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO EN PLACAS Y TUBOS
PRIMER DÍA (26.09.19)
OBJETIVO
El objetivo de esta práctica es aprender a realizar un medio de cultivo, tanto en placas Petri como en tubos y también recordar la esterilización por calor en el autoclave.
Material necesario:
SEGUNDO DÍA (03.10.19)
Este día nos disponíamos a emplacar el medio de cultivo en la placa de Petri pero no se esterilizaron bien los medios contenidos en los matraces por lo que tuvimos que posponerlo para el siguiente día, aunque si se pudo realizar el medio de cultivo en el tubo.
La preparación del medio en el tubo es muy sencilla, solo hay que sacarlos del autoclave y se dejan enfriar inclinándolos ligeramente sobre alguna superficie. De esta forma obtenemos el medio en "pico de flauta" o "slant"
Cabe añadir que puesto que no había en ese momento papel de aluminio en el laboratorio, para autoclavar se ponen dos bolsas de autoclave
TERCER DÍA (04.10.19)
Al día siguiente preparamos el medio de cultivo en placa de Petri, para ello autoclavamos los matraces de nuevo, con la doble bolsa y preparamos el material.
OBJETIVO
El objetivo de esta práctica es aprender a realizar un medio de cultivo, tanto en placas Petri como en tubos y también recordar la esterilización por calor en el autoclave.
Material necesario:
- Balanza
- vidrio de reloj o papel de aluminio
- cucharilla‐espátula
- agua destilada
- matraz aforado, pipeta
- matraz erlenmeyer
- tapón para el matraz
- placa calefactora‐agitadora
- imán
- varilla-recoge imanes
- medios de cultivo deshidratados
- agua destilada
- placas de Petri
- tubos de ensayo
- Mechero bunsen
PREPARACIÓN DE UN MEDIO SÓLIDO EN PLACA
1. Lo primero que hicimos fue pesar la cantidad correspondiente de medio de cultivo, de acuerdo con los cálculos realizados, como en nuestro bote de agar nutritivo ponía que debía hacerse a una concentración de 40 g/L y como nosotros queríamos hacer 250 mL, debíamos pesar 10 gramos de agar. (Esta concentración siempre nos la tiene que indicar el fabricante), así que pesamos esa cantidad en la balanza analítica y luego con ayuda de un embudo echamos el agar en un matraz Erlenmeyer.
Previamente habíamos medido hasta enrasar en un matraz aforado los 250 mL de agua destilada y fuimos echando poco a poco sobre el agar y moviendo mientras con una varilla.
NOTA: Hicimos 250 mL de medio de cultivo por cada 6 personas en la clase aunque luego estábamos en grupos de 3 para verterlos en los tubos. (Por cada 3 personas, seis tubos).
2. Introducimos la pulga (imán) en el matraz Erlenmeyer para que al ponerlo sobre la placa calefactora- agitadora se consiga la agitación.
Ponemos el matraz Erlenmeyer sobre la placa calefactora- agitadora y lo tapamos con un tapón (que no lo cierre completamente) y lo dejamos hasta que tome un aspecto transparente (hasta que se vea el imán agitarse).
3. Cuando tome ese aspecto, apagamos la placa y cogemos el matraz siempre con un guante y lo ponemos sobre la mesa y con ayuda de una varilla recoge imanes sacamos la pulga del matraz.
Dejamos enfriar hasta que adquiera una temperatura de 40-45 ºC.
Pudimos observar que se quemó un poco el medio, y pensamos que podía deberse a que no se mezcló bien con la varilla, pero le pasó a tres medios realizados en clase y además tardaron bastante en volverse transparentes así que posiblemente estuvieron tiempo de más en la placa.
4. Mientras se enfria, con ayuda de una pipeta cogimos 6 mL de agua destilada y lo pusimos en un tubo, para que nos sirviera de referencia de hasta donde teníamos que llenar los tubos con medio de cultivo.
Luego se vertió el medio sobre cada uno de los tubos, intentando dejarlo más o menos al mismo nivel (no tienen que estar exactamente en la misma cantidad, pero solo porque nos sirva de referencia).
Tras ello se dejó enfriar y en una hora aproximadamente se metieron todas las gradillas con sus tubos y los medios en la nevera, ya que no nos daba tiempo a esterilizar en el autoclave, por lo que eso se realizaría al próximo día.
NOTA: Es importante rotular los tubos, sobre todo cuando hay varios grupos.
1. Lo primero que hicimos fue pesar la cantidad correspondiente de medio de cultivo, de acuerdo con los cálculos realizados, como en nuestro bote de agar nutritivo ponía que debía hacerse a una concentración de 40 g/L y como nosotros queríamos hacer 250 mL, debíamos pesar 10 gramos de agar. (Esta concentración siempre nos la tiene que indicar el fabricante), así que pesamos esa cantidad en la balanza analítica y luego con ayuda de un embudo echamos el agar en un matraz Erlenmeyer.
Previamente habíamos medido hasta enrasar en un matraz aforado los 250 mL de agua destilada y fuimos echando poco a poco sobre el agar y moviendo mientras con una varilla.
NOTA: Hicimos 250 mL de medio de cultivo por cada 6 personas en la clase aunque luego estábamos en grupos de 3 para verterlos en los tubos. (Por cada 3 personas, seis tubos).
2. Introducimos la pulga (imán) en el matraz Erlenmeyer para que al ponerlo sobre la placa calefactora- agitadora se consiga la agitación.
Ponemos el matraz Erlenmeyer sobre la placa calefactora- agitadora y lo tapamos con un tapón (que no lo cierre completamente) y lo dejamos hasta que tome un aspecto transparente (hasta que se vea el imán agitarse).
3. Cuando tome ese aspecto, apagamos la placa y cogemos el matraz siempre con un guante y lo ponemos sobre la mesa y con ayuda de una varilla recoge imanes sacamos la pulga del matraz.
Dejamos enfriar hasta que adquiera una temperatura de 40-45 ºC.
Pudimos observar que se quemó un poco el medio, y pensamos que podía deberse a que no se mezcló bien con la varilla, pero le pasó a tres medios realizados en clase y además tardaron bastante en volverse transparentes así que posiblemente estuvieron tiempo de más en la placa.
4. Mientras se enfria, con ayuda de una pipeta cogimos 6 mL de agua destilada y lo pusimos en un tubo, para que nos sirviera de referencia de hasta donde teníamos que llenar los tubos con medio de cultivo.
Luego se vertió el medio sobre cada uno de los tubos, intentando dejarlo más o menos al mismo nivel (no tienen que estar exactamente en la misma cantidad, pero solo porque nos sirva de referencia).
Tras ello se dejó enfriar y en una hora aproximadamente se metieron todas las gradillas con sus tubos y los medios en la nevera, ya que no nos daba tiempo a esterilizar en el autoclave, por lo que eso se realizaría al próximo día.
NOTA: Es importante rotular los tubos, sobre todo cuando hay varios grupos.
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| Agar nutritivo |
SEGUNDO DÍA (03.10.19)
Este día nos disponíamos a emplacar el medio de cultivo en la placa de Petri pero no se esterilizaron bien los medios contenidos en los matraces por lo que tuvimos que posponerlo para el siguiente día, aunque si se pudo realizar el medio de cultivo en el tubo.
La preparación del medio en el tubo es muy sencilla, solo hay que sacarlos del autoclave y se dejan enfriar inclinándolos ligeramente sobre alguna superficie. De esta forma obtenemos el medio en "pico de flauta" o "slant"
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| Tubos en "slant" |
Cabe añadir que puesto que no había en ese momento papel de aluminio en el laboratorio, para autoclavar se ponen dos bolsas de autoclave
TERCER DÍA (04.10.19)
Al día siguiente preparamos el medio de cultivo en placa de Petri, para ello autoclavamos los matraces de nuevo, con la doble bolsa y preparamos el material.
- Primeramente dejamos enfriar un poco el matraz para no producir quemaduras, pero tampoco se puede dejar demasiado tiempo porque se solidifica y ya no podríamos verterlo.
- Luego encendemos el mechero bunsen y flameamos el cuello del matraz erlenmeyer.
- Quitamos la tapa de la placa de Petri y vertemos cuidadosamente el medio.
- Cerrar y se agita un poco para que se expanda por toda la superficie de la placa
- Volvemos a flamear el cuello.
- Así se siguió hasta que se acabó el medio
- Apagamos el mechero bunsen
- Obtuvimos 15 placas, las cuales se dejan solidificar, y una vez que lo están se les da la vuelta y se guardan el frigorífico limpio.
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OBSERVACIONES
- Solo en una placa no se distribuyó correctamente el medio por la superficie, por lo que cabe añadir que es importante agitarlo un poco tras verterlo.
- Apagar el mechero bunsen en cuanto no se necesite.
- Es importante que cuando se limpie el matraz con el medio de cultivo, se ponga el tapón de seguridad en el fregadero, ya que los restos se pueden solidificar y atascarlo.
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