PRÁCTICA 13: ANTIBIOGRAMA
16.01.20
OBJETIVO
Determinar la sensibilidad del microorganismo Klebsiella ante determinados antibióticos para saber si es sensible o resistente.
FUNDAMENTO
En el laboratorio se puede estudiar la sensibilidad a los antimicrobianos que presentan bacterias aisladas desde una muestra biológica.
La sensibilidad a los antimicrobianos junto con la identidad de la bacteria aislada y ciertos factores del huésped constituyen las bases para la elección de una terapia antimicrobiana adecuada.
Además nos permite determinar el grado de sensibilidad en función del halo de inhibición que se produzca. Los métodos que vamos a utilizar es difusión en agar (por disco) y épsilon test.
Material necesario:
Reactivos:
Difusión en agar (por disco).
Cogemos la placa de Petri con el microorganismo que vamos a inocular (Kliebsella) el cual está en TSA y sabemos que lleva más de 18 horas. Seguidamente inoculamos 3 colonias en 5 mL de SSF y movemos hasta que quede completamente disuelto y no queden restos de colonias, seguidamente tapamos el bote de la SSF con el microorganismo con ayuda de parafilm y lo metemos en la estufa durante 5 minutos a 37ºC. Lo sacamos transcurrido el tiempo pero como aún no presentaba turbidez necesaria porque no era turbidez 0,5 en la escala de MacFarland, así que lo metimos otros 5 minutos.
Una vez sacado de la estufa realizamos una siembra en masa con un hisopo del microorganismo en una placa de Petri con medio Mueller Hinton dandole 4 pases a la placa. Luego se ponen 4 discos de antibioticos diferentes separados unos 15 mm del borde de la placa y minimo 20 mm entre ellos. NOTA: no es necesario numerar la placa para saber los discos ya que vienen las iniciales en los mismos discos.
Los antibioticos empleados fueron los siguientes:
Este método nos permite determinar la concentración mínima inhibitoria. En este caso se realizó todos los pasos iguales que en la difusión por disco hasta en el momento de la siembra en masa, una vez realizada dicha siembra se pone una tira de épsilon test y se incuba al igual que las de difusión por disco.
Este método utiliza un gradiente de concentración del antibiótico que se difunde por el agar y despues de la incubación se forma una zona elíptica de inhibición de crecimiento.
OBSERVACIÓN DE RESULTADOS:
Transcurridas 24 horas procedimos a la lectura de los resultados, los cuales nos indicaban que nuestro microorganismo (Klebsiella) es sensible al cloranfenicol con un halo de inhibición de 20 mm, es sensible, a la NN es sensible con un halo de 35 mm, a la C es sensible con un halo de 42 mm y a la VA es resistente.
En el épsilon test apareció sin ningún halo por lo que es resistente a la amoxicilina.
OBJETIVO
Determinar la sensibilidad del microorganismo Klebsiella ante determinados antibióticos para saber si es sensible o resistente.
FUNDAMENTO
En el laboratorio se puede estudiar la sensibilidad a los antimicrobianos que presentan bacterias aisladas desde una muestra biológica.
La sensibilidad a los antimicrobianos junto con la identidad de la bacteria aislada y ciertos factores del huésped constituyen las bases para la elección de una terapia antimicrobiana adecuada.
Además nos permite determinar el grado de sensibilidad en función del halo de inhibición que se produzca. Los métodos que vamos a utilizar es difusión en agar (por disco) y épsilon test.
Material necesario:
- Mechero bunsen
- Asa de siembra
- Placa de Petri con medio de cultivo
- Estufa.
- Hisopo
Reactivos:
- SSF
- Discos de distintos antibióticos
Microorganismo empleado: Klebsiella
PROCEDIMIENTODifusión en agar (por disco).
Cogemos la placa de Petri con el microorganismo que vamos a inocular (Kliebsella) el cual está en TSA y sabemos que lleva más de 18 horas. Seguidamente inoculamos 3 colonias en 5 mL de SSF y movemos hasta que quede completamente disuelto y no queden restos de colonias, seguidamente tapamos el bote de la SSF con el microorganismo con ayuda de parafilm y lo metemos en la estufa durante 5 minutos a 37ºC. Lo sacamos transcurrido el tiempo pero como aún no presentaba turbidez necesaria porque no era turbidez 0,5 en la escala de MacFarland, así que lo metimos otros 5 minutos.
Una vez sacado de la estufa realizamos una siembra en masa con un hisopo del microorganismo en una placa de Petri con medio Mueller Hinton dandole 4 pases a la placa. Luego se ponen 4 discos de antibioticos diferentes separados unos 15 mm del borde de la placa y minimo 20 mm entre ellos. NOTA: no es necesario numerar la placa para saber los discos ya que vienen las iniciales en los mismos discos.
Los antibioticos empleados fueron los siguientes:
- Tobramicina
- Colistina
- Celoxitin
- Cloranfenicol
Tras ello se incubó 24 horas a 37 ºC
Épsilon test
Este método nos permite determinar la concentración mínima inhibitoria. En este caso se realizó todos los pasos iguales que en la difusión por disco hasta en el momento de la siembra en masa, una vez realizada dicha siembra se pone una tira de épsilon test y se incuba al igual que las de difusión por disco.
Este método utiliza un gradiente de concentración del antibiótico que se difunde por el agar y despues de la incubación se forma una zona elíptica de inhibición de crecimiento.
OBSERVACIÓN DE RESULTADOS:
Transcurridas 24 horas procedimos a la lectura de los resultados, los cuales nos indicaban que nuestro microorganismo (Klebsiella) es sensible al cloranfenicol con un halo de inhibición de 20 mm, es sensible, a la NN es sensible con un halo de 35 mm, a la C es sensible con un halo de 42 mm y a la VA es resistente.
En el épsilon test apareció sin ningún halo por lo que es resistente a la amoxicilina.
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